HBL-1 人彌漫大B淋巴瘤細(xì)胞
Catalogue No.: C1427
Product Format: a 15 ml centrifuge tube
Culture Properties：懸浮
Complete Growth Medium: 89%1640+10%FBS+1%雙抗
Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Application: Cells and cancer research
NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.
Components
Item | Specifications |
a 15 ml centrifuge tube | 2X106 |
Manual | 1 copy |
Operation steps for cell culture
- 輕輕吹勻細(xì)胞，收集懸液1000rpm(150g左右)離心3min，棄上清；
- 用新的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，均勻分為幾份，接種到新的培養(yǎng)瓶中，并補(bǔ)加足量的*培養(yǎng)基；
（懸浮細(xì)胞比較依賴細(xì)胞密度，細(xì)胞傳代前及傳代后密度不宜過低，過低可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢或者死亡。細(xì)胞傳代前培養(yǎng)基不能*變黃，不然細(xì)胞狀態(tài)變差會(huì)導(dǎo)致傳代失敗。傳代過程吹打細(xì)胞應(yīng)盡量輕柔，不應(yīng)吹出過多氣泡。）
- 將細(xì)胞放回37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
傳代比例: 不同細(xì)胞生長(zhǎng)速度不一，具體傳代比例視細(xì)胞生長(zhǎng)速度而定，大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代，生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞可以1:2傳代。
Cell cryopreservation
- 凍存液：92%*培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇）
- 降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過夜后液氮保存。
Tips：
- 細(xì)胞經(jīng)過運(yùn)輸后，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞si亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。加5ml PBS重懸細(xì)胞，再900-1000rpm(約150g)離心3min，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時(shí)碎片比較少，傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。
- 細(xì)胞生長(zhǎng)不均時(shí)，可以將細(xì)胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。
- 細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢時(shí)，可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)（不超過20%），也可以根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，選擇傳代細(xì)胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
不同細(xì)胞貼壁性差異比較大，所以消化時(shí)間差別較大，20s-10min均有可能，具體以細(xì)胞消化到相互分離但未脫落，并可以輕輕吹下為準(zhǔn)，嚴(yán)禁消化到細(xì)胞*漂浮。
